紫外分光光度計是廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)學(xué)等多個科學(xué)研究領(lǐng)域的儀器之一。紫外分光光度計儀器分析法是利用物質(zhì)分子吸收紫外可見光譜區(qū)輻射的一種儀器分析方法。其基本原理依據(jù)朗伯·比爾定律-一光被透明介質(zhì)吸收的比例與入射光的強度無關(guān)，光的吸收與吸收層厚度、溶液濃度、光吸收率成正比，可用下式表示:

A=kxbxc  (A為吸光度;k為摩爾吸光系數(shù);b為光程，即盛放溶液的液槽的透光厚度;c為溶液濃度。)

儀器結(jié)構(gòu)

紫外分光光度計由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示系統(tǒng)五大部分組成。

光源:是提供符合要求的入射光的裝置，有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源用于可見光區(qū)，一般為鎢燈和鹵鎢燈，波長范圍是350nm~1000nm;氣體放電光源用于紫外光區(qū)，一般為氫燈和氘燈，連續(xù)波長范圍是180nm~360nm。

單色器:功能是將光源產(chǎn)生的復(fù)合光分解為單色光和分出所需的單色光束，它是分光光度計的心臟部分。

吸收池:又稱比色皿，供盛放試液進(jìn)行吸光度測量之用，其底及兩側(cè)為毛玻璃，另兩面為光學(xué)透光面，為減少光的反射損失，吸收池的光學(xué)面必須完全垂直于光束方向。根據(jù)材質(zhì)可分為玻璃池和石英池兩種，前者用于可見光光區(qū)測定，后者用于紫外光區(qū)。

檢測器:是將光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘柕难b置，測量吸光度時，并非直接測量透過吸收池的光強度，而是將光強度轉(zhuǎn)換為電流信號進(jìn)行測試，這種光電轉(zhuǎn)換器件稱為檢測器。

信號顯示系統(tǒng):是將檢測器輸出的信號放大，并顯示出來的裝置。

優(yōu)勢

可重復(fù)使用樣品;可以快速進(jìn)行測量;儀器使用操作簡單;數(shù)據(jù)分析操作簡單;產(chǎn)品成本、操作成本低。

局限性

雜散光。波長選擇器并不完美，來自寬波長范圍的少量光仍可能從光源傳輸，這可能會導(dǎo)致嚴(yán)重的測量錯誤。

光散射。這通常是由液體樣品中的懸浮固體引起的，這可能會導(dǎo)致嚴(yán)重的測量誤差。比色皿或樣品中存在的氣泡會散射光，導(dǎo)致無法重現(xiàn)結(jié)果。

來自多個吸收物種的干擾。為了進(jìn)行適當(dāng)?shù)亩糠治觯瑧?yīng)將每種化學(xué)物質(zhì)從樣品中分離出來并單獨檢查。

組件的偏差。任何儀器組件未對準(zhǔn)定位，尤其是固定樣品的比色皿，都可能產(chǎn)生不可重復(fù)和不準(zhǔn)確的結(jié)果。

常見問題與解決措施

問題1:接通電源后，光源不亮

原因:①保險管燒壞;②光源燈泡損壞。

措施:①更換保險管;②檢查氘燈和鎢燈是否損壞，若損壞則及時更換燈泡。

問題2:吸光值出現(xiàn)負(fù)數(shù)

原因:沒做空白對照，樣品吸光值小于空白參比液。

措施:先做空白對照。

問題3:基線某段噪音很高

原因:濾光片受潮發(fā)霉，導(dǎo)致光能量損失嚴(yán)重。

措施:更換濾光片。

問題4:吸光值信號上下擺動

原因:開關(guān)觸點因長期氧化導(dǎo)致接觸不良。

措施:用金屬活化劑清洗按鍵觸點。

注意事項

開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。

比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3~4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。

測定時，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K，要盡可能及時清理干凈。

實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)掉電源，再將干燥劑放入樣品室內(nèi)，并蓋上防塵罩。